哪些操作会缩短色谱柱寿命及如何避免？

 

　　样品前处理不规范是缩短色谱柱寿命的首要元凶。未过滤的样品中含有的颗粒物会堵塞色谱柱筛板和固定相孔隙，导致柱压骤升、分离效率下降。此外，样品中的强极性杂质、重金属离子等会与固定相发生不可逆吸附，污染色谱柱。规避此类问题，需严格做好样品前处理：液体样品需经0.22μm或0.45μm滤膜过滤，去除悬浮颗粒；固体样品需充分提取、离心后取上清液过滤；对于复杂基质样品，可通过固相萃取、液液萃取等方法去除干扰杂质，避免污染物进入色谱柱。

 

　　流动相配制与使用不当同样会损伤色谱柱。使用未脱气的流动相，会因气泡进入色谱柱导致柱内压力波动，破坏固定相结构，同时影响检测基线稳定性。流动相pH值超出色谱柱耐受范围，会造成固定相水解、键合相脱落，尤其是反相色谱柱，通常耐受pH值为2-8，超出此范围会显著缩短寿命。规避措施包括：流动相配制后需超声脱气15-20分钟，或使用在线脱气装置；严格按照色谱柱说明书要求控制流动相pH值，必要时添加缓冲盐调节，且缓冲盐需用高纯度水配制，使用前过滤；避免长期使用高浓度盐溶液作为流动相，实验结束后需用纯水充分冲洗色谱柱，防止盐析出堵塞管路。

 

　　色谱条件设置不合理会加剧色谱柱损耗。柱温过高会加速固定相老化，导致分离性能衰减，不同类型色谱柱有其最佳使用温度范围，如反相色谱柱通常不超过60℃。流速过快会增大柱内压力，长期高压会使色谱柱床层塌陷，一般需根据色谱柱内径选择合适流速，常规4.6mm内径色谱柱流速控制在0.8-1.2mL/min。此外，进样量过大易造成色谱柱过载，导致峰形拖尾、柱效下降。规避方法为：严格遵循色谱柱说明书设定柱温与流速，避免骤升骤降温度；根据色谱柱容量和样品浓度合理控制进样量，一般进样体积不超过20μL。

 

　　实验后色谱柱维护缺失也是寿命缩短的重要原因。实验结束后未及时冲洗，流动相中的残留杂质会吸附在固定相表面，长期积累会导致色谱柱“失活”。不同类型色谱柱冲洗方式不同，反相色谱柱需先用甲醇-水（50:50）冲洗30分钟，再用纯甲醇冲洗20分钟封存；正相色谱柱则需用正己烷冲洗后封存。同时，色谱柱存放需避免阳光直射、剧烈震动，封存液需定期更换，防止细菌滋生污染色谱柱。